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廣州碩譜生物科技有限公司,SPE小柱,是目前國內生產SPE小柱較好的生產廠家。NH2固相萃取柱廠家
反相模式下,溶劑體系的極性應以樣品溶劑、淋洗溶劑、洗脫溶劑的次序遞減,并以遞增程度遞減。要確保所選擇的樣本溶劑不會洗脫目標物,所選擇的淋洗劑應在不洗脫目標物的前提下,很大限1度地洗脫干擾物,所選洗脫劑應能碰巧完全洗脫目標物。
正相位模式是 SPE小柱相的固定相極性大于流動相極性的分離模式。主要用途:
固相萃取材料極性表面與物極性官能團極性相互作用;極性力比非極性力強,但比離子力弱;常用的極性基團有羥基,胺基,巰基等。弱極化基質環(huán)境有利于形成極性力,因為弱極化溶劑不能與極性固定相形成氫鍵功能團。結果表明: SPE正相萃取后,樣品基質多為弱極性,如正己烷、二1氯甲1烷、菜油等,而目標物多含有極性官能團。
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渠道效應
當 SPE小柱填料裝實后,流速過小柱時,液體是以層流通過填料層,將填料層充分浸潤,潤濕的液面截層向上推進,見附圖;流速過大時,柱床厚度過大,可能在填料內形成溝道,液流將穿過溝道,快速通過小柱,而使填料浸潤不足,從而使得體與填料的接觸面積大大減少,嚴重影響填料對目標物質的保留性。
溶液環(huán)境的 pH如何影響化合物在柱狀物上的保持性,我們?yōu)槭裁匆P注該化合物的 pKa值,這些因素需要放在C18柱狀物上嗎?
A:首先, Ka指酸度系數(shù),也稱為酸離解常數(shù),可以被理解為酸離解H離子的能力,而 pKa=- lgKa,對于酸,在環(huán)境中 pH離子的平衡如下
常用極性固定相包括:硅膠、氧化鋁、弗羅里硅土和含有氰基(CN)、氨基(NH2)、二醇基(2 OH)的粘接硅膠。
正相態(tài)時,溶液體系的極性應按樣品溶劑、淋洗溶劑、洗脫溶劑的順序遞增,洗脫強度也隨之遞增。要確保所選的樣本溶劑不會洗脫目標物,所選的淋洗液應在不洗脫目標物的前提下,很大限1度地洗脫干擾物,這樣洗脫目標物才能碰巧完全洗脫目標物。
因此,面對反相、正相固相萃取,在實際應用中應選擇哪一種?鑒于大部分化合物都具有多種功能基團,在實際操作中,主要根據(jù)目標物和干擾物的性質考慮采用何種萃取機理。
負離子交換填充物(SAX, MAX)
·分析物:陰離子(酸)化合物
·方法:
(a)活化:樣品在非極性有機溶1劑中作活化處理時,可用樣品溶劑:在極性溶劑中作樣品處理時,可用水溶性有機溶1劑作活化處理,然后用水平衡,然后用合適 pH值的緩沖液平衡。
上樣:樣品溶液的 pH值應大于其 pKa的兩個單位(以保證其電荷)。
洗脫液 pH值:洗脫液 pKa小于兩個單位(中和分析物的電荷)。
相對于弱酸性化合物而言,弱堿性化合物在陽離子交換固相萃取過程中99%的分解都是陽離子,這一弱堿性化合物所處的環(huán)境系統(tǒng)的 pH值必須低于其 pKa至少兩個 pH單位。洗脫時,環(huán)境體系的 pH值應高于化合物的 pKa值至少兩個 pH單位,99%的化合物此時為中性狀態(tài),可通過適當?shù)娜軇年栯x子交換柱中洗脫。
選擇離子交換固相萃取柱的種類:為能有效地洗脫吸附在一起的離子化合物,對于含有強離子官能團的目標化合物,一般選用弱離子交換柱;對于含有弱離子官能團的化合物,一般選用強離子交換柱。該方法可避免目標化合物與吸附劑官能團同時處于離子化狀態(tài),使目標化合物始終保持在不能洗脫的保留狀態(tài)。
反相式C18分離柱
C18是十八烷基碳鏈上的反相固定相的統(tǒng)稱。除以普通硅膠為基質外,以C18鏈為基質的高聚物小球、氧化鋁、氧化鋯等反相固定相,均可稱為C18鏈。有很多種類型的C18,常見的C18是硅膠基質,稱為 ODS,C18能夠在純水中工作,被稱為C18-AQ。
C18反相柱的固定相為非極性固定相,流動相極性大于固定相極性,常用的溶劑一般為水和甲1醇、乙1腈、四氫呋1喃、異丙1醇等與水互溶的溶劑,適合分離非極性或弱極性的化合物,其洗脫順序一般為樣品極性從高到低。
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劑時值;
洗滌液通道和柱子,有溫度控制,加熱到30攝氏度容易沖洗;
長期使用緩沖液應注意觀察接頭處是否有析出,如有白鹽析出,用10%硝i酸定期沖洗液路(取出柱子,沖洗30 mL10%硝i酸溶液,再用5倍水沖洗)可避免液路堵塞;
選用緩沖液要使用可靠的試劑,避免不純鹽引起不必要的麻煩;過渡流動相是指有機相和水相的組成與分析流動相相同,但溶液中不含緩沖鹽。
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對由非極性力吸附到反相 SPE柱上的目標物,可用弱極性溶劑洗脫,如氯i仿、環(huán)己i烷、乙i酸乙i酯等。只有當溶劑的洗脫強度足夠大時,才能使目標物與吸附劑之間的范德華力破壞,使目標物從 SPE柱洗脫。即使是極性更強的甲i醇,對許多化合物而言,也有足夠的非極性力量來洗脫它。有時候,單種溶劑無法徹底洗脫疏水性強的目標物,可以考慮使用二氯甲i烷:乙i酸乙i酯(1:1,體積比)。
反相模式下,溶劑體系的極性應以樣品溶劑、淋洗溶劑、洗脫溶劑的次序遞減,并以遞增程度遞減。要確保所選擇的樣本溶劑不會洗脫目標物,所選擇的淋洗劑應在不洗脫目標物的前提下,zui大限度地洗脫干擾物,所選洗脫劑應能碰巧完全洗脫目標物。