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樣品如果溶解度太低如何上制備HPLC？

（1）了解一下樣品的性質(zhì),根據(jù)其酸堿性,極性等性質(zhì)，通過調(diào)節(jié)溶劑的pH值等,以達到較好的溶解度。

（2）樣品可能某種晶型難溶，這樣可以加入其他溶劑以助溶。

（3）不是一定要用流動相來溶解樣品，對溶解度差的樣品，可以選擇甲醇，THF或DMSO等溶解樣品。特別是DMSO，對一般的化合物溶解度都很好。并且在反相柱上不保留，不會造成干擾。而且DMSO的洗脫能力很弱，一般不會影響峰型。

（4）可以固體上樣。

多肽的分離制備,如何上量？如何增大分離度?

反相HPLC應當是很好的分離小肽方法，用CH3CN或CH3OH：H2O（95：5）做流動相，看保留如何，若無保留，建議改用其他色譜方法進行分離。

關于多肽的分離，首先要知道它的分子量大小，然后選擇不同類型的填料，如孔徑的大小。我們先在分析柱（4.6mm內(nèi)徑）上做一下實驗,找到很大的分離度,這一過程的難度是很大的,要不斷地改變流動相和固定相,然后再線性或非線性放大到制備,放大的倍數(shù)按分析柱的實驗結(jié)果。分離后可以通過冷凍干燥得到固體。

還可以考慮離子交換來分l離。

制備色譜

制備色譜是以分離出純物質(zhì)為目的的色譜系統(tǒng)，分析色譜是以分析出樣品組分信息為目的的色譜系統(tǒng)，基于他們目的的不同，制備色譜相對于分析色譜有很多不同特征，不能簡單等同。

當我們在實驗室中想得到納克乃至毫克級的純物質(zhì)時，稍微改裝下分析型色譜系統(tǒng)就能簡單輕松的完成，不過，若所需制備的純品量很大，此時，再用分析型色譜系統(tǒng)分離純化，可以預見這將是一場“災難”。

制備色譜常用的色譜模式有低壓，中壓，高壓三種，以應對不同類型和不同純度要求的樣品的分離，同時盡可能減少成本。

　制備色譜儀分類有多種　　

1、按流動相物理狀態(tài)可分：制備型氣相色譜儀、制備型液相色譜儀和制備型超臨界流體色譜儀?！　?

2、按分離模型可分：制備型線性色譜儀和制備型非線性色譜儀?！　?

3、按分離對象的屬性可分：制備型有機色譜儀和制備型無機色譜儀?！　?

4、按固定相物理狀態(tài)可分：制備型氣液色譜儀、制備型氣固色譜儀、制備型液液色譜儀和制備型液固色譜儀。　　

5、按用途可分：制備型生物色譜儀、制備型制藥色譜儀、制備型化工色譜儀、制備型食品色譜儀、制備型菌體色譜儀等。