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Tris緩沖液不僅被廣泛用作核酸和蛋白質(zhì)的溶劑,還有許多重要用途。Tris被用于不同pH條件下的蛋白質(zhì)晶體生長。Tris緩沖液的低離子強度特點可用于線蟲(C. elegans)核纖層蛋白(lamin)的中間纖維的形成。Tris也是蛋白質(zhì)電泳緩沖液的主要成分之一。此外,Tris還是制備表面活性劑、硫化促進劑和一些的中間物。Tris也被用作滴定標準物。緩沖特性Tris為弱堿,在室溫(25℃)下,它的pKa為8.1;根據(jù)緩沖理論,Tris緩沖液的有效緩沖范圍在pH7.0到9.2之間。Tris堿的水溶液pH在10.5左右,一般加入鹽酸以調(diào)節(jié)pH值至所需值,即可獲得該pH值的緩沖液。但同時應注意溫度對于Tris的pKa的影響。
Tris緩沖液是在生物化學研究中使用較廣泛的一種緩沖劑,其本身為弱堿,常用有效pH在“中性”范圍,Tris-HCl緩沖液:pH=7.5~8.5;Tris-磷酸鹽緩沖液:pH=5.0~9.0。
Tris-HCl緩沖液優(yōu)點
堿性較強,可以只用這一種緩沖液配置由酸到堿的范圍pH緩沖液;
對生物化學過程干擾很小,不與鈣、鎂離子及重金屬離子發(fā)生沉淀。
Tris-HCl緩沖液缺點
pH受濃度影響較大,稀釋10倍,pH變化大于0.1
溫度效應大,如4℃時pH=8.4,37℃時pH=7.4
易吸收空氣中的二氧化碳
對某些pH電極有一定干擾作用,要使用與Tris溶液具有兼容性的電極
而生化實驗室常用的緩沖系主要有磷酸、檸檬酸、碳酸、醋酸、酸、Tris(三羥甲基氨基甲烷)等系統(tǒng),生化實驗或研究工作中要慎重地選擇緩沖體系,因為有時影響實驗結(jié)果的因素并不是緩沖液的pH值,而是緩沖液中的某種離子。如硼酸鹽、檸檬酸鹽、磷酸鹽和三羥甲基甲烷等緩沖劑都可能產(chǎn)生不需要的化學反應。硼酸鹽:硼酸鹽與許多化合物形成復鹽、如蔗糖。檸檬酸鹽:檸檬酸鹽離子容易與鈣結(jié)合,所以存在有鈣離子的情況下不能使用。
常用貯液與溶液
1mol/L亞精胺(Spermidine): 溶解2.55g亞精胺于足量的水中,使終體積為10ml。分裝成小份貯存于-20℃。
1mol/L精胺(Spermine):溶解3.48g精胺于足量的水中,使終體積為10ml。分裝成小份貯存于-20℃。
10mol/L乙酸胺(ammonium acetate):將77.1g乙酸胺溶解于水中,加水定容至1L后,用0.22um孔徑的濾膜過濾。