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反相模式下，溶劑體系的極性應(yīng)以樣品溶劑、淋洗溶劑、洗脫溶劑的次序遞減，并以遞增程度遞減。要確保所選擇的樣本溶劑不會洗脫目標(biāo)物，所選擇的淋洗劑應(yīng)在不洗脫目標(biāo)物的前提下，很大限1度地洗脫干擾物，所選洗脫劑應(yīng)能碰巧完全洗脫目標(biāo)物。

正相位模式是 SPE小柱相的固定相極性大于流動相極性的分離模式。主要用途：

固相萃取材料極性表面與物極性官能團(tuán)極性相互作用；極性力比非極性力強(qiáng)，但比離子力弱；常用的極性基團(tuán)有羥基，胺基，巰基等。弱極化基質(zhì)環(huán)境有利于形成極性力，因?yàn)槿鯓O化溶劑不能與極性固定相形成氫鍵功能團(tuán)。結(jié)果表明： SPE正相萃取后，樣品基質(zhì)多為弱極性，如正己烷、二1氯甲1烷、菜油等，而目標(biāo)物多含有極性官能團(tuán)。

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渠道效應(yīng)

當(dāng) SPE小柱填料裝實(shí)后，流速過小柱時，液體是以層流通過填料層，將填料層充分浸潤，潤濕的液面截層向上推進(jìn)，見附圖；流速過大時，柱床厚度過大，可能在填料內(nèi)形成溝道，液流將穿過溝道，快速通過小柱，而使填料浸潤不足，從而使得體與填料的接觸面積大大減少，嚴(yán)重影響填料對目標(biāo)物質(zhì)的保留性。

溶液環(huán)境的 pH如何影響化合物在柱狀物上的保持性，我們?yōu)槭裁匆P(guān)注該化合物的 pKa值，這些因素需要放在C18柱狀物上嗎？

A：首先， Ka指酸度系數(shù)，也稱為酸離解常數(shù)，可以被理解為酸離解H離子的能力，而 pKa=- lgKa，對于酸，在環(huán)境中 pH離子的平衡如下

反相分離柱C18的適用范圍

C18反相分離柱廣泛應(yīng)用于天然產(chǎn)物的提取，藥1物合成研究與開發(fā)，生物制藥等領(lǐng)域。若樣品極性偏大， Rf值非常接近，則不能分離正相模式；終產(chǎn)物要求純度98%以上，采用正相模式達(dá)不到；樣品在正相條件下存在溶解問題——不妨考慮采用反相C18模式分離。由于其填料粘合技術(shù)的成熟和良好的分離能力，C18柱已成為日常接觸分離提純研究人員zui多的反相柱。

反相式C18反相分離柱的主要參數(shù)

分離柱C18有多種參數(shù)，大致可分為四個方面：相鍵(包括修飾、封端)、填充載體(硅膠純度、填充顆粒類型、粒徑、孔徑)、柱體本身(柱效、柱內(nèi)徑、柱長)和隱藏參數(shù)(比表面積、碳含量等)。小編想選擇以下幾個大家容易忽略的

反向作用機(jī)制：

反相萃取分離主要是利用固相萃取材料官能團(tuán)與目標(biāo)化合物碳?xì)滏I之間的非極性作用力。反相非極性的 SPE柱通常更適合從極性基質(zhì)中提取分離出非極性和中等極性的目標(biāo)化合物。

對利用非極性作用力吸附于非極性 SPE柱的目標(biāo)化合物，可用氯1仿、環(huán)己1烷、乙1酸乙1酯等具有非極性的溶劑洗脫。當(dāng)溶劑的洗脫強(qiáng)度足夠大，可以使目標(biāo)化合物與吸附劑非極性基團(tuán)間的范德華力不受影響時，使其在 SPE柱中順利洗脫。即使是極性更強(qiáng)的甲1醇，對許多化合物而言，也有足夠的非極性力量來洗脫它。有時候，單種溶劑無法完全洗脫疏水性的目標(biāo)化合物，可以考慮使用二氯甲1烷：乙1酸乙1酯(1:1，體積比)。

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清洗與干燥參數(shù)選?。喝裟繕?biāo)化合物為中性化合物，且選擇了疏水性的非極性填料(如C4、C8、C18等)，則可用水或柱子平衡的緩沖液清洗。若分析物對固相萃取柱的吸附能力較強(qiáng)，則可在洗滌液中加入水溶性，提高洗滌效果。

當(dāng)發(fā)現(xiàn)回收率下降時，收集該組分，并檢測目標(biāo)化合物是否在這一階段被洗脫。若經(jīng)調(diào)整 pH使可離子化目標(biāo)化合物中性化，并通過疏水力被 SPE柱吸附，則必須注意洗滌時 pH保持不變，以免由于 pH的變化而導(dǎo)致目標(biāo)化合物在洗滌過程中丟失。

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若目標(biāo)化合物為陰或陽離子(如采用 SAX、 PSA、NH2、 SCX、 CBA和 PRS等離子交換柱萃取)，可用柱平衡的緩沖液清洗。對帶單電分析物，緩沖液的離子強(qiáng)度不能超過50 mmol/L。對帶雙電的分析物，緩沖液的離子強(qiáng)度不能超過10 mmol/L。

水份的存在對特定環(huán)境中目標(biāo)化合物的洗脫及后續(xù)分析有一定的影響。所以 SPE柱必須先干燥，然后才能洗脫。烘干方法通常采用正、負(fù)壓力。

正壓法通常是將帶一定壓力的空氣或氮?dú)鈴?SPE柱上吹走填料中的水；負(fù)壓法則是將一定真空度從萃柱下吹走殘余的水。有時候，為了更好地去除殘余的水份，可以使用量的極性，比如50μ L。若目標(biāo)化合物易揮發(fā)，要注意控制正壓/負(fù)壓除水時間，避免在干燥過程中造成損失。